关于流动相的温度控制与pH调节，在液相色谱分析中至关重要，它们直接影响到分离效果、保留时间、选择性和峰形等关键分析参数。以下是对这两个方面的详细探讨：

　　一、流动相的温度控制

　　温度作为高效液相色谱（HPLC）系统中的一个重要参数，对分离效果有着显著的影响。为了获得可靠和重现性好的分析结果，精确的温度控制至关重要。

　　1.温度对分离效果的影响：温度直接影响固定相和流动相之间的相互作用力。选择一个适宜的温度范围可以提高分离效率。通常，色谱柱的温度可以设置在30℃至50℃之间，以获得较好的分离效果。以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。

　　2.温度对保留时间的影响：温度变化会影响样品在固定相中的吸附和解吸过程，从而改变保留时间。一般来说，温度升高会导致保留时间缩短。

　　3.温度对选择性的影响：温度变化可以改变固定相和流动相的性质，从而影响选择性。例如，在反相HPLC中，温度升高可能会导致疏水性相互作用减弱，从而改变组分的洗脱顺序。

　　4.温度对峰形的影响：主要体现在扩散系数和流动相粘度的变化上。适当的温度控制可以有效减少峰展宽，获得更尖锐的峰形。

　　5.温度控制设备：

　　恒温箱：是HPLC系统中较常用的温度控制设备。通过将整个柱子放置在恒温箱中，可以保持柱温恒定，从而减少温度波动对分离效果的影响。

　　柱温控制器：是一种直接安装在色谱柱上的温度控制装置。它可以通过电加热或冷却的方式精确控制柱温，适用于需要频繁调整温度的实验。

　　流动相预热器：用于在进入色谱柱之前对流动相进行预热。这样可以减少由于流动相温度低而导致的柱温下降，从而提高分离效果。

　　二、流动相的pH调节

　　在液相色谱分析中，流动相的pH值对样品的电离状态、保留行为和峰形等均有显著影响。因此，根据待测化合物的性质选择合适的pH值至关重要。

　　1.选择合适的pH值：应注意色谱柱说明书中的pH适用范围，并避免恶劣的pH条件。同时，pH值的调整要考虑到待测化合物的pKa值。一般来说，pH值应至少高于pK值两个单位，以便于化合物的离子化。

　　2.常用的pH调节剂：

　　酸类：如甲酸、乙酸和C₂HF₃O₂等。这些酸能够降低流动相的pH值，但需要注意其挥发性和对检测波长的影响。

　　碱类：如氨水和三乙胺等。这些碱能够提高流动相的pH值，但过高可能会损坏色谱柱中的硅胶颗粒。

　　盐类：特别是具有缓冲能力的盐类，如甲酸盐、乙酸盐和磷酸盐等。这些盐类能够很好地控制流动相的pH值，并根据不同缓冲盐中两种盐的配比，可以配置出一定pH的缓冲溶液。但需要注意磷酸盐流动相体系不易挥发，对质谱和色谱柱的伤害极大。

　　3.pH值对峰形的影响：当化合物的pKa与流动相pH重合时，会导致分子与离子形式共存，化合物的峰型不好。因此，建议将pH控制在化合物的pKa±2的范围以外，以获得更尖锐的峰形。

　　流动相的温度控制与pH调节在液相色谱分析中起着至关重要的作用。通过精确的温度控制和合适的pH值选择，可以优化分离效率、保留时间、选择性和峰形，从而获得更加可靠和重现性好的分析结果。